Citotoxicidade: qual é a melhor opção MTT ou Timidina radioativa?

a) Timidina tiritiada b) BrdU d) Picnose (morte)



Em violeta, FORMAZAN

O MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide thiazolyl blue) é o sal tetrazolium que, após clivagem por desidrogenases mitocondriais de células, torna-se insolúvel em água pela formação de cristais de formazan e solúveis em solventes orgânicos. Em meio de cultura com células, após adição de Dimetil Sulfóxido (DMSO-solvente orgânico), o MTT, convertido em formanzan, é solubilizado e pode ser lido por espectrofotometria. Esta reação pode ser expressa em percentual de células vivas de acordo com a absorvância obtendo-se, o percentual da viabilidade celular. Para isso, após completar o período de 18 horas, a placa de cultura de células será retirada da estufa e o sobrenadante de cada poço é desprezado. Para alguns colegas essa técnica está sujeita a viés de leitura por parte do pesquisador. A timidina é um nucleosídio, que pode ser marcado com o trítio e sua incorporação ao DNA ser visualizada após emulsão sensível a esta radiação. A timidina é uma timina ligada a um anel de desoxiribose que pode ser incorporada ao DNA na fase S do ciclo celular. A revelação mostra grãos de prata, ficam incorporados ao DNA evidenciando que a célula ainda estava em divisão celular (viável). Mais recentemente, a bromodeoxiuridina, 5-bromo-2-deoxiuridina, que é um nucleosídio sintético, também tem sido usado para estudos de citotoxicidade. O BrdU pode ser incorporado ao DNA, como a timidina, e através de anticorpos sua revelação pode ser realizada. A diferença entre o MTT, a Timidina e BrdU, além do preço é o fato de ser avaliada por citometria de fluxo. VER MATERIA